酶標(biāo)儀在實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用越來(lái)越普及，酶標(biāo)儀的檢定也就越來(lái)越重要。酶標(biāo)儀的檢定內(nèi)容主要包括干涉濾光片波長(zhǎng)誤差及重復(fù)性、吸光度誤差、穩(wěn)定性和重復(fù)性、儀器靈敏度、通道差異及吸光度的線性。
吸光度示值穩(wěn)定性(r)的檢定：
選用492nm波長(zhǎng)或儀器*的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，測(cè)量并記錄酶標(biāo)儀的初始吸光度示值(A0)，5min、10min后分別再測(cè)一次。吸光度示值穩(wěn)定性(r)計(jì)算：r等于后兩次吸光度示值的大值與A0的差。
波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性的檢定：
從酶標(biāo)儀取出儀器所用有標(biāo)稱波長(zhǎng)(λ)的干涉濾光片(405，450，492，620nm)，使用波長(zhǎng)示值誤差優(yōu)于±0.5nm的分光光度計(jì)，將干涉濾光片用1mm左右銅或鋁金屬絲懸掛固定于分光光度計(jì)比色杯架第二孔右外側(cè)，干涉濾光片平面需與入射光束垂直。以1nm的改變幅度，從低到高，檢測(cè)各干涉濾光片在(±20)nm范圍內(nèi)的透射比，繪制波長(zhǎng)一透射比特性曲線，求出峰值波長(zhǎng)(λi)，每片干涉濾光片重復(fù)檢測(cè)三次并求峰值波長(zhǎng)均值。
干涉濾光片波長(zhǎng)示值誤差(△λ)計(jì)算：△λ=峰值波長(zhǎng)均值-λ;波長(zhǎng)重復(fù)性(δλ)計(jì)算：δλ等于三次檢測(cè)峰值波長(zhǎng)大值和小值之差。
吸光度示值誤差的檢定：
先將吸光度標(biāo)稱值(A)分別為0.2，0.5，1.0，1.5的四塊光譜中性濾光片(分光光度計(jì)附件)，在分光光度計(jì)上依次選用405，450，492，630nm波長(zhǎng)或酶標(biāo)儀*的專一波長(zhǎng)，以空氣為參比，檢測(cè)光譜中性濾光片的吸光度。每個(gè)濾光片每個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)三次，取均值作為該片在該波長(zhǎng)下的吸光度標(biāo)準(zhǔn)值(As)。然后，將四塊光譜中性濾光片同時(shí)平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，酶標(biāo)儀連續(xù)測(cè)量3次，依次記錄儀器吸光度示值，并計(jì)算平均值(Ax)。
吸光度示值誤差(△A)計(jì)算：△A=Ax-As，取計(jì)算后的所有△A中的誤差大值作為該酶標(biāo)儀的吸光度示值誤差。
吸光度重復(fù)性的檢定：
按吸光度示值計(jì)算的方法將吸光度標(biāo)稱值(A)為0.5或1.0光譜中性濾光片，以空氣為參比，于酶標(biāo)儀微孔酶標(biāo)板的空板架某一固定孔位重復(fù)測(cè)定6次(n)，記錄每一次吸光度(Xi)，求吸光度均值，按下式計(jì)算RSD偏差值(RSD)，以RSD表示儀器吸光度重復(fù)性。
